Tirzepatid Nečistoty

Tirzepatid Nečistoty|Kontrola nečistot Tilpeptide|Vlastní syntéza nečistot a potvrzení struktury|Vědecký-peptid

Kontrola nečistot Tirzepatid - pro GLP-1/GIP duální{4}}výzkum kvality léčiv, podávání zpráv o generických léčivech. Věda-Peptide poskytuje vlastní syntézu nečistot souvisejících s tilpeptidem, včetně delečních peptidů, oxidovaných nečistot, produktů pro odlupování mastných kyselin, potvrzení vaší struktury nečistot, atd. spektroskopická studie s daty potvrzení struktury. Vítejte a kontaktujte nás.

Tirzepatid (Tirzepatid) je duální agonista GLP-1/GIP, se kterým přišla Eli Lilly, a který je v těchto dvou letech v plném proudu. Má dobrý účinek na snížení cukru a silný účinek na redukci hmotnosti a nazývá se modernizovaná verze "zázračného léku na hubnutí". Tuzemští výrobci peptidových generických léků na to mnozí zírají – kdo si po vypršení patentu může nejdříve proběhnout kvalitu výzkumu, kdo bude mít možnost urvat první generikum.

 

Kvalitu tilpeptidu však není tak snadné studovat. Je složitější než simethikon, má 39 aminokyselin, postranní řetězec mastné kyseliny (kyselina eikosandiová) a linker. Nečistoty, které se mohou objevit během procesu syntézy, jsou mnohem vyšší než u běžných peptidů. Chybějící peptidy, oxidační nečistoty, produkty uvolňování mastných kyselin, dimery, nečistoty související s linkerem-musí mít kontrolu, každá musí být jasná.

 

Nashromáždili jsme mnoho zkušeností se syntézou komplexních peptidových nečistot. Specializujeme se na studium tilpeptidu a víme, jaké jsou potíže v jeho profilu nečistot a jaké jsou základní kontrolní položky. Můžeme přizpůsobit syntézu různých kontrol nečistot tilpeptidu podle vašich potřeb s údaji o potvrzení struktury a pomůžeme vám stanovit metodu tak, že je méně pravděpodobné, že vám bude vystaven dodatek při podání.

Molekulární struktura tilpeptidu určuje, že jeho profil nečistot je mnohem složitější než profil obecných peptidů. Když provádíme studie nečistot, zaměřujeme se hlavně na tyto kategorie:

Chybějící peptid
39 aminokyselin, z nichž kterákoli během procesu syntézy chybí, je nečistota. Retenční časy chybějících peptidů na HPLC byly široce distribuovány, s různou polaritou chybějících peptidů v různých polohách. Některé chybí na N-konci, některé uprostřed a některé blízko místa připojení mastné kyseliny. Od zákazníka jsme obdrželi objednávku na 15 chybějících peptidů v různých pozicích, abychom lokalizovali všechny možné chybějící nečistoty v jejich procesu.

Oxidující nečistoty
Met v sekvenci tilpeptidu je náchylný k oxidaci na sulfoxid a poté na sulfon. Oxidované nečistoty se často objevují ve studiích stability a po určité době rostou. Provedli jsme srovnání, za zrychlených podmínek po dobu jednoho měsíce může oxidační vrchol bez kontroly narůst na více než 0,3 %.

Produkty odbourávání mastných kyselin
Toto je nečistota jedinečná pro tilpeptid. Jeho postranní řetězec mastné kyseliny (kyselina eikosandiová) je připojen k lysinu prostřednictvím linkeru a tato modifikace může být částečně uvolněna během syntézy nebo skladování, což vede k odstranění nečistot z mastných kyselin-. Problematičtější je, že k uvolňování může docházet na různých místech - mezi mastnou kyselinou a linkerem nebo mezi linkerem a peptidem -, což vede k různým nečistotám. Pro naše zákazníky jsme syntetizovali několik nečistot souvisejících s mastnými kyselinami-, od úplného vylučování až po malé části.

Dimery/polymery
Dvě nebo více molekul tilpeptidu se shlukují a tvoří dimer nebo vyšší. Molekulová hmotnost dimeru je dvakrát větší než u hlavního píku a při HPLC se často jedná o široký pík, takže musí být speciálně separován a čištěn, než může být použit jako kontrola. Provedli jsme přípravu dimerů a trvalo několik kol čištění, než bylo dosaženo čistoty více než 95 %.

Nečistoty související-s linkerem
Modifikace mastné kyseliny tilpeptidu používá linker (např. -Glu, PEG, atd.), a tento linker sám o sobě může během syntézy produkovat vedlejší reakce, generující nečistoty s chybějícími nebo neúplnými linkery. Tento druh nečistoty se nenachází v běžných peptidech, ale je jedinečný pro tilpeptid, který je třeba specificky studovat.

Deamidované nečistoty
Asparagin (Asn) a glutamin (Gln) jsou snadno deamidovány za kyselých podmínek nebo zahřívání, což vede k izomerům. V sekvenci tilpeptidu je několik Asn a Gln a deamidační nečistota se často objevuje v testu nucené degradace, takže k lokalizaci nečistoty je třeba použít kontrolní produkt.

Diastereoizomery
Během syntézy s dlouhým řetězcem mohou jednotlivé aminokyseliny podléhat racemizaci, což vede k diastereoizomerům. Obsah tohoto druhu nečistot nebývá vysoký, ale odborníci se při deklaraci zeptají a je lepší mít kontrolní přípravek pro potvrzení.

Mnohé z těchto nečistot nelze zakoupit a je třeba je syntetizovat na zakázku. Udělali jsme mnoho projektů na přizpůsobení tilpeptidových nečistot, pokrývajících všechny výše uvedené kategorie.

Delece peptidové řady
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95 %, s potvrzením MS a NMR. Syntetizovali jsme sadu peptidů s odstupem 5 aminokyselin od N-konce k C-konci.

Oxidující nečistoty
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95 % a můžeme poskytnout spektrum LC-MS pro potvrzení stupně oxidace. Sulfoxid a sulfon se oddělují pomocí HPLC a my můžeme udělat obojí.

Produkty odbourávání mastných kyselin
To je jedna z nejobtížnějších nečistot, se kterou se v tilpeptidu pracuje. Řetězec mastné kyseliny může být zcela nebo částečně (např. chybí několik posledních uhlíků). Můžeme syntetizovat řadu variant pro různé polohy řetězce. V jednom z nejsložitějších projektů, které jsme dělali, nás zákazník požádal, abychom syntetizovali nečistotu s 8 uhlíky chybějícími v řetězci mastných kyselin, a trvalo nám dva měsíce, než jsme to udělali správně.

Dimer
Dimery vytvořené křížovým{0}}spojením nebo ne{1}}kovalentními interakcemi mohou být připraveny různými metodami a izolovány a purifikovány, aby poskytovaly kontroly vysoké čistoty. Čištění dimerů je pracné, ale máme zkušenosti, abychom věděli, jak monomery oddělit.

Nečistoty související-s linkerem
Linker (-Glu, PEG atd.) může chybět nebo je neúplný, což vede k řadě souvisejících nečistot. Můžeme syntetizovat různé varianty s chybějícími linkery, zkrácenými linkery nebo špatně spárovanými linkery a pomoci vám vytvořit spektra takových nečistot.

Deamidované nečistoty
Pro místa Asn a Gln v sekvenci můžeme připravit deamidované kontroly nečistot nucenou degradací nebo cílenou syntézou. Rozdíl v molekulové hmotnosti po deamidaci je pouze 1, což není snadné MS rozlišit, proto k potvrzení obvykle používáme NMR nebo speciální chromatografické podmínky.

Jiné přizpůsobené nečistoty
Pokud ve svém výzkumu objevíte novou neznámou nečistotu, můžeme vám pomoci analyzovat strukturu a syntetizovat ji. Pošlete nám vzorky, my provedeme LC-MS analýzu, odvodíme strukturu, poté směrovou syntézu a poté porovnáme retenční čas a hmotnostní spektrum, abychom potvrdili shodu. Tento proces jsme provedli mnohokrát a úspěšnost je poměrně vysoká.

Vývoj a validace analytických metod
Při nastavování metody HPLC nebo LC{0}}MS je nutná kontrola nečistot pro lokalizaci, stanovení separace, ověření lineárního rozsahu a výtěžnost. Bez kontroly chybí validace metody. Mnoho zákazníků nás žádá, abychom nejprve provedli několik klíčových nečistot pro nastavení metody a poté pomalu doplnili zbytek.

Heterogenní hmotnostní spektrometrie
Když je deklarováno generické léčivo, je vyžadována komplexní kvalitativní a kvantitativní analýza procesních nečistot a degradačních produktů. Umístění, obsah a struktura každé nečistoty musí být potvrzena kontrolním produktem. Viděli jsme, že prohlášení o informacích bylo odesláno k vyplnění, devětkrát z deseti je nečistotám tohoto kusu nerozuměl.

Studie stability
Při dlouhodobé{0}}testování stability a zrychlených testech je nutné určit, které produkty degradace jsou dominantní a jaký je trend v obsahu. S kontrolou nečistot můžeme přesně kvantifikovat a monitorovat. Zákazník prováděl stabilitu přípravy tilpeptidu a zjistil, že vrchol degradace rostl velmi rychle za zrychlených podmínek, takže jsme jej analyzovali a syntetizovali pomocí MS, abychom potvrdili strukturu, a pak se zákazníkovi ulevilo, že to nahlásil.

Testování dávkového uvolnění
Po uvedení na trh musí být každá šarže API nebo formulace testována na danou látku. Kontroly nečistot jsou základními nástroji pro testování uvolňování.

Informace o prohlášeních o generických léčivech
Studie nečistot jsou klíčovou částí informací o podání. Poskytnutí úplného profilu nečistot a kontrolních údajů významně snižuje riziko vydání revize.

Případ 1: farmaceutická společnost, program generických léků tilpeptide
Vyvíjejí generickou verzi tilpeptidu a potřebují kompletní sadu kontrol nečistot pro validaci metody. Upravili jsme pro ně 12 nečistot: 5 chybějících peptidů, 2 oxidované nečistoty, 1 dimer, 2 produkty uvolňující mastné kyseliny a 2 nečistoty související s linkerem. Každý z nich má čistotu více než 95 % a je doprovázen MS a NMR údaji. Vedoucí projektu řekl: "Nečistot tilpeptidu je dvakrát více než u jiných peptidů, ale můžete je vyrobit všechny a data jsou kompletní, což nám ušetří spoustu práce." Později byla úspěšně dokončena validace jejich metody a nyní se připravují na prohlášení.

Případ 2: CRO společnost, profilování nečistot
Uskutečnili kvalitní výzkumný projekt tilpeptidu, který vyžadoval komplexní analýzu procesních nečistot. Poslali nám vzorky surového peptidu a my jsme provedli analýzu LC-MS, odvodili možné struktury několika neznámých nečistot, pak je cíleně syntetizovali a porovnali retenční časy a hmotnostní spektra a potvrdili čtyři nové nečistoty - dvě z nich souvisely s linkerem- a dvě z nich byly varianty uvolňování mastných kyselin. Klient použil tato data k upřesnění profilů nečistot a úspěšně prošel přijetím klienta.

Případ 3: Studie stability, biotechnologická společnost
Zkoumali stabilitu formulace tilpeptidu a zjistili, že množství degradačního produktu se rychle zvyšuje za zrychlených podmínek, ale nevěděli, co to bylo. Vzorek jsme analyzovali pomocí LC-MS a předpokládali jsme, že se jedná o deamidační nečistotu na určitém místě Asn, a poté jsme jej cíleně syntetizovali a potvrdili porovnáním. Zavedli test pomocí této kontroly a přesně monitorovali trend degradačního produktu. Později, když předkládali posudek, byla tato část údajů odborníky zdůrazněna a kvůli solidním údajům nebyla vyplacena žádná náhrada.

Tilpeptid je oblíbený produkt, ale studium nečistot je choulostivá práce, zejména produkty exfoliace mastných kyselin a nečistoty související-s linkerem, se kterými si mnoho výrobců neví rady. Pokud provádíte kvalitní výzkum nebo obecný vývoj tilpeptidu a potřebujete kontroly nečistot, neváhejte nás kontaktovat. Udělali jsme hodně práce, víme, jaké jsou potíže, a víme, jak je překonat.